2.2.2.5 液相分离-同位素质谱(LC-IRMS)法

该方法是对原来的C4植物糖方法的改进,由于元素分析T-同位素质谱(EA-IRMS)法只能对蜂蜜中C4植物 糖进行鉴定,对于更为先进的掺假手段掺入C3植物糖无能为力。该方法的原理是如果蜂蜜是单一花种的纯正蜂 蜜,其中含有果糖、葡萄糖、二糖和三糖的同位素值应 该相差不大。但如果掺入了其他来源的糖,有可能就会造成其中的糖的同位素值产生变化。通过测定其中糖的同位素差值,可以判定蜂蜜是否掺杂造假。费晓庆等[30] 采用液相色谱/元素分析-同位素比值质谱联用法(LC/EA- IRMS)对国内蜂蜜掺假情况进行了研究,基于测定得到 的38个纯正蜂蜜样品的碳同位素δ13C值数据,提出了纯正蜂蜜样品的δ13C值范围,对150个日常检测样品、蜂农和 蜂蜜供应商的蜂蜜样品分别采用建立的LC/EA-IRMS和国 家标准方法EA-IRMS进行鉴定,LC/EA-IRMS方法检出 58个掺有C3或C4植物糖浆的阳性样品,而EA-IRMS方法 仅检出7个掺有C4植物糖浆的阳性样品。但该方法存在一 定的缺陷,如果是多花种蜂蜜,该方法也有可能检测出阳性。而且如果造假者在掺杂前事先确定糖浆和蜂蜜的 同位素值,然后在蜂蜜中加入同位素值相近的糖浆,该方法就不能检测出。

2.2.3 检测酶活性法

2.2.3.1 检测β-呋喃果糖苷酶方法

β-呋喃果糖苷酶又称蔗糖酶或转化酶,可以催化水解β-D-果糖苷键，将蔗糖直接转化成葡萄糖和果糖。天然蜂蜜含有α-葡萄糖苷转化酶，该转化酶虽然在一定条件下会保持相对长时间的稳定性，但是研究证明即使在蜂蜜中有很高的活性也不可能让大量的蔗糖在短时间内水解。因此，如果在加入蔗糖的同时又加入了β-呋喃果糖苷酶，就可将蔗糖直接转化成葡萄糖和果糖，由于这两种单糖在天然蜂蜜中占了蜂蜜糖的90%以上，以至于混合后各种糖的含量未发生明显的变化，在这种情况下掺杂糖浆和白砂糖的蜂蜜有可能借助于HPLC也检验不出来。由于β-呋喃果糖苷酶催化反应底物后，本身还是留在反应体系中，因此在掺入这种果糖后的蜂蜜中就有β-呋喃果糖苷酶残留，而在天然蜂蜜中不含有该酶，可以把该酶作为检测指标来鉴别蜂蜜掺假。王介平等[31]利用建立的高效液相色谱法测定蜂蜜中β-呋喃果糖苷酶酶活来鉴别蜂蜜掺假，通过对天然蜂蜜和两种市售蜂蜜的β-呋喃果糖苷酶酶活的检测发现，天然蜂蜜中不含有β-呋喃果糖苷酶，而对照蜂蜜样品中的β-呋喃果糖苷酶酶活很高，分别为36.22U/kg和117.30U/kg。由此可见对照样品中掺入了其他的外来物质。

目前国内出入境实验室和国外实验室针对β-呋喃果糖苷酶建立了相应的检测方法，针对甜菜糖来源的果葡糖浆掺假进行检测，能够控制一部分的造假行为。但如果造假者针对该酶进行去活处理，或用其他的大米来源的果葡糖浆，该方法就不能检测出。该方法局限性的根本原因一个是蜂蜜本身容易掺假，另一个就是这种技术不如掺假技术高明，造假者对β-呋喃果糖苷酶进行去活处理该方法就不再有效。