2 结果与讨论

2.1 酶分子量及亚基分子量

茶花粉 SOD 经 SDS-PAGE 鉴定已达到电泳纯(图 1),

测得其分子量为69.5kD,亚基分子量为34.7kD,是由 相同亚基组成的二聚体。

2.2 酶的性质研究

2.2.1 酶的类型

茶花粉SOD 经PAGE 电泳后得到的胶条分别用PBK、CHCl3-CH3CH2OH(3:5/V:V)、KCN(5mmol/L)和H2O2 (5mmol/L)浸泡后进行活性染色。发现用CHCl3-CH3CH2OH 处理过的胶条染色后酶活带没有明显变化,说明该

SOD可能是Cu, Zn-SOD 或Fe-SOD,用H2O2 处理过的 胶条活性染色后酶活带消失,说明该SOD不是Mn-SOD,

用KCN处理后其酶活带消失,说明它不是Mn-SOD,也 不是Fe-SOD,因此从茶花粉中提纯的SOD为Cu, Zn-SOD。

2.2.2 酶的等电点 

通过圆盘连续等电聚焦电泳法测得该蛋白的等电点为 pH4.1。

2.2.3 N- 末端氨基酸

用 DNS-Cl 法得到的 DNS- 氨基酸通过聚酰胺夹心薄膜层析法得知该蛋白 N- 末端氨基酸为 Gly(见图 2)。

2.2.4 氨基酸组成分析 

茶花粉SOD酸水解后经氨基酸分析仪测定结果如表1 所示。

2.2.5 圆二色谱分析结果

花粉SOD圆二色谱分析(图3)测定[θ]222 为-13516 deg·cm2/dmol。按下列公式可以计算出该蛋白的α螺 旋含量为21.8%。

α%:蛋白质的α螺旋的百分含量;[θ]₂₂₂:SOD 在 222nm 处的摩尔椭圆率;62000:多聚 Lys 在 100% α 螺旋时的[θ]₂₂₂ 的值。