本文综述了国内外蜂胶对非特异性免疫系统的作用及其机理的研究进展，探讨了蜂胶对非特异性免疫反应中各种细胞以及相关免疫介质的影响。研究结果表 明：蜂胶能有效提高巨噬细胞、自然杀伤细胞和多形核粒细胞的活性，调节细胞因子的分泌和免疫细胞的增殖，降低巨噬细胞氧化应激反应。蜂胶 具有复杂的化学含有和广泛的生物学活性。近年来，有关蜂胶免疫调节、消炎和抗肿瘤等方面的研究引起了众多学者的关注，蜂胶对免疫系统作用机理的体内和体外 实验研究也取得了许多新的进展。免疫系统是各种器官、组织、细胞和机体分子等构成的一个复杂的网状系统，其在广义上分为特异性免疫系统和非特异性免疫系 统。非特异性免疫系统的细胞包括吞噬细胞、肥大细胞、血小板和自然杀伤细胞，其中吞噬细胞又包括两个主要谱系-单核/巨噬细胞和多形核细胞。本文结合体内 外实验，从细胞和分子水平就国内外蜂胶对机体非特异性免疫的作用及其机理进行了综述。1、蜂胶对巨噬细胞的影响巨噬细胞不仅是抗原递呈细胞，而且是溶解病原体或肿瘤细胞的效应细胞，在机体免疫反应中具有重大作用。巨噬细胞含溶酶体可分泌大量重要的炎症和免疫应答物质，包括多种酶、反应氧、 反应氮、细胞因子抑制剂、细胞因子、补体等。在过去的十多年，越来越多的研究证明蜂胶具有活化巨噬细胞、调节其吞噬功能以及细胞因子、补体、反应氧和反应 氮的产生等功能，从而影响巨噬细胞在抗微生物、抗肿瘤、抗炎等方面的反应。蜂胶的标准化在蜂胶研究中十分重要，但是蜂胶化学含有的高度多样化增加 了这一问题的解决难度。在试验设计中，体外或体内试验的选择和蜂胶提取溶剂、给制剂剂量、给制剂周期和给制剂途径等的确定都是不可或缺的因素。表1列出了蜂胶在 不同制剂物剂量、化学组成在体外实验条件下对巨噬细胞影响的研究结果。表1 蜂胶对巨噬细胞的影响 免疫试验 报告结果 剂量 主要活性含有 鉴定方法 研究者 补体系统的替代途径和经典途径 下降 63-1000 μg/ml 酚酸、酚酯、酚醇醛、酮、黄酮类、芪类、香豆素类 HPLC GC-MS Ivanovska等 巨噬细胞的扩展和活性 上升 10-5M 5-咖啡鞣酸、咖啡鞣酸、4-咖啡鞣酸、4，6-二咖啡酰奎宁酸 HPLC Tatefuji等 巨噬细胞活性 双氧水（上升）；一氧化氮（下降）；IFN-γ（向上） 2.5-100μg/ml 异戊二烯-p-香豆酸苯并吡喃、挥发油、双萜类、三萜类 TLC、GC、GC-MS Orai等 注：上升：促进作用；下降：抑制作用；GC：气相色谱法；GC-MS：气相色谱-质谱法；TLC：薄层色谱法；HPLC：高效液相色谱法1.1巨噬细胞与活性氮NOS 作用下L-精氨酸所释放的NO是巨噬细胞活化标志之一。NO是巨噬细胞杀伤肿瘤细胞、抗细菌、真菌以及寄生虫等感染的炎症反应的重要因子、具有调节 Th1-Th2平衡、抑制DNA合成、线粒体呼吸和真菌及细菌膜内主动运输等功能。另外，NO也是重要的神经递质、血管舒张剂和组织修复细胞介质。然 而，NO也能以剂量、时间和部位依赖方式引起细胞毒性作用，促进炎症反应，损伤机体组织等。Moriyasu等研究发现0.2-1.0mg/ml的蜂胶能抑制受LPS刺激的巨噬细胞产生NO。Hu等研究了蜂胶水提液和蜂胶醇提液对鼠类急性炎症的影响，证明这两种提取液均能抑制NO的产生。Krol等指出这种作用来源于黄酮类化合物（10-50μm）。蜂胶对NO的作用呈剂量依赖性。Orsi等研究了蜂胶醇提取液对巨噬细胞活性的影响，小鼠给予蜂胶24h后进行体外细胞测定，结果显示：浓度为 5，10，20μg/ml蜂胶对NO没有显著影响，浓度为50，100μg/ml的蜂胶对NO产生抑制作用。体内实验中，250，500，1000μg /ml蜂胶对NO产生促进作用，3000和6000μg/ml蜂胶则产生抑制作用。Than等研究了巴西绿蜂胶的水提物和醇提物抑制小鼠巨噬细胞 J774.1产生NO的作用（培养基中包含LPS10μg/ml），结果显示蜂胶水提物和醇提物都能有效抑制NO合成，且其作用效果受剂量影响。IC50 值分别为37.8，78.9μg/ml。NO的产生受细胞因子、免疫细胞、细菌产物、肿瘤细胞以及内毒素等众多因素的影响，蜂胶对NO的抑制作用则主要是通过细胞因子的调节作用得以实现，但是具体机理目前尚未得到完善的阐述。本文从已经得到较多研究的以下的两个方面来阐述蜂胶对NO的抑制作用机理：（1）TGF-β1是最著名的NOS2所表达的内源性抑制剂，它使NOS2的mRNA稳定性下降，NOS2蛋白质的合成减慢而分解加快。在T细胞或者外周单核血细胞的培养液中添加蜂胶之后，其上清液中的TGF-β1浓度增加，证明了蜂胶对NO的抑制作用。（2）IFN- γ是激活巨噬细胞的重要细胞因子，IFN诱导基因编码的转录酶以产生活性酶；IFN与LPS结合后处理小鼠的巨噬细胞，这些细胞表达大量的NOS。LEO 等对结肠炎大鼠（PG-PS诱导）腹腔注射30mg/kg的蜂胶1周，结果显示CAPE降低大鼠结肠NF-kB水平和IFN-γ结合诱导的NO含量的增 多，并指出其作用机理-CAPE通过作用于iNOS（诱导性NOS）启动子中的NF-kB位点，或者通过直接抑制具有催化活性的i-NOS的活性，从而抑 制iNOS基因的转录。1.2巨噬细胞与活性氧机体经常会产生超氧化物自由基等代谢产物，自由基在细胞膜脂质、细胞质蛋白或DNA中十分 活跃，可对机体造成损伤，而细胞内存在清除自由基的体系，以保护细胞。正常生理状态下，氧自由基和氧抑制剂处于动态平衡。吞噬细胞产生的氧化剂不仅会破坏 被吞噬的微生物也会破坏重要的活性分子，它们也存在于与炎症疾病相关的受损组织中。Orsi等研究了蜂胶醇提液对巨噬细胞活性的影响，小鼠给予蜂胶24h后进行体内外的细胞测定，结果显示蜂胶（5，10，20μg/ml）能促进双氧水的 产生。体内试验结果显示，250，500μg/ml蜂胶能增强巨噬细胞对IFN-γ的反应性能，促进双氧水的释放；与IFN-γ活化组相比较，经 1000，3000和6000μg/ml蜂胶处理和IFN-γ活化的巨噬细胞双氧水的释放受到显著抑制。李云峰等在体外条件下研究槲皮素（20-80μmol/L）对巨噬细胞氧化应激（LPS诱导氧化应激）的影响。结果发现，与LPS对照组比较，添加槲皮素 组上清液抗氧化力升高、NO浓度下降，细胞ROS含量、NOS活性及MDA水平下降。试验证明一定浓度的槲皮素可增强小鼠巨噬细胞的抗氧化能力和吞噬能 力，并降低氧化应激反应。1.3巨噬细胞与细胞因子活化的巨噬细胞分泌细胞因子、酶、补体系统分子和促凝血剂。巨噬细胞可以通过促炎症性细胞因子促进炎症反应，招募其他细胞，调节其活力并诱导黏附；也可以释放抑制性分子抑制炎症、免疫应答和T细胞的增殖。Leo等对结肠炎大鼠（PG-PS诱导）腹腔注射30mg/kg的蜂胶1周，结果显示蜂胶降低大鼠结肠NF-kB水平和细胞因子（IFN-γ，IL- 1β）水平，显著减轻结肠损伤。体外研究发现，CAPE可以抑制巨噬细胞（NR8383）产生NF-kB和TNF-α，显著促进DNA断裂；在结肠上皮细 胞（SW620）的研究中也得到类似结果。说明CAPE通过抑制NF-kB而降低促炎症细胞因子的产生以及减少巨噬细胞的凋亡。研究者还指出这一作用机理 很可能与CAPE对PG-PE诱导的结肠炎的减弱作用相关。Khayyal等以13%的蜂胶水提液作为轻度哮喘病人阶段佐剂，给制剂2个月。在研究结束时，经蜂胶阶段的病人夜间发病的概率和严重程度明显降低，呼吸功 能显著改善，这与前列腺素、白细胞三烯和促炎细胞因子（TNF-α，IL-6,IL-8）的降低以及IL-10的提高相关。以慢性阻塞性肺疾病 （COPD）病人为研究对象得到了相似结果。经过蜂胶辅助阶段的病人肺泡巨噬细胞的NF-kB活性较COPD组显著降低，IL-8分泌减少，说明蜂胶对 COPD阶段起一定作用。细胞因子功能的行使是很复杂的，其中一个细胞因子的出现会影响若干个其他细胞因子的产生或者它们的反应性。多种细胞因子相互影响，形成一个细胞因子网络， 发挥多重生理功效。应该说，蜂胶对细胞因子的作用也是多方面的，其主要是从整体出发调节细胞因子，从而作用于免疫系统以发挥其功能。2、蜂胶对自然杀伤细胞（NK）的影响 NK细胞是不同于T、B细胞的淋巴细胞亚群，非黏着、非吞噬细胞，对一些肿瘤细胞核病毒感染细胞具溶解作用。NK细胞与特异免疫协同作用，可通过IgG受 体杀伤带IgG的靶细胞；NK细胞激活之后释放IFN-γ、IL-1、GM-CSF等细胞因子，在调节血细胞生产、免疫应答中具有重要的作用。Sforcin等指出以10%的蜂胶给制剂3天，NK细胞对鼠淋巴瘤（黑鼠瘤Yac-1细胞）的细胞毒性增强。这证实了以前的一个发现，即经短期蜂胶给制剂之 后免疫系统相关效果好转，免疫应答作用提高。潘明研究了蜂胶提取物对荷瘤小鼠免疫系统的影响，将S180肉瘤移植到BaIB/C纯种小鼠，结果表明蜂胶提 取物对NK细胞杀伤活性有明显增强作用，且显著提高淋巴细胞增殖能力和IL-2的含量，说明蜂胶提取物能够显著提高荷瘤小鼠免疫系统的活性。另有实验证明 蜂胶可以增强中老年大鼠的自然杀伤细胞活性和巨噬细胞吞噬功能，说明蜂胶可以提高中老年大鼠的免疫力。在NK研究中酶发现季节因素对蜂胶的影响。NK细胞受细胞因子调控，如IFN（α、β、γ）、TNF-α、TGF-β1、IL-1β、IL-2、IL- 4、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-21、IL-23、，但是蜂胶激活这些细胞的机制目前尚不清楚。可能是蜂胶激活巨噬细胞，使 其产生如YNF-α、IL-12之类的细胞因子，它们作用于NK细胞，从而提高其细胞毒性。3、蜂胶对多形核粒细胞的影响 多形核粒细胞可分为中性粒细胞、嗜碱粒细胞和嗜酸粒细胞。其中中性粒细胞的数量最多，是血液白细胞的主要含有。粒细胞不表现对抗原的固有特异性，但通常与抗体和补体协同而作用于微生物的急性炎症，它们的主要作用是吞噬和杀灭病原体。Chu研究了鲤鱼抗嗜水气单孢菌疫苗以蜂胶做佐剂的功效，结果表明与无佐剂的疫苗处理组以及未接种疫苗组相比较，实验组动物的白细胞活性增强，吞噬细胞数目增多，血清中抗嗜水气单孢菌的抗体增多。 通过蜂胶（65，325mg/kg）对卵清蛋白诱导的哮喘动物模型的作用研究，发现蜂胶可抑制模型大鼠血清中抗卵清蛋白的IgE和IgG1水平和气管高反 应性水平，支气管肺泡灌洗液中嗜酸细胞活化趋化因子浓度和嗜酸粒细胞数量则无明显改变。蜂胶组大鼠脾细胞中IFN-γ、IL-6和IL-10等细胞因子水 平低于对照组，经ConA刺激之后的脾细胞IL-10的分泌收到强烈抑制，IFN-γ的分泌增多。另有学者以CAPE进行了类似研究，结果发现 CAPE（10mg/kg）能明显降低动物模型的哮喘反应，如肺附近血管和气管中炎症细胞的涌入，气管腔窄化；气管高反应性的发展；支气管肺泡灌洗液 TNF-α和Th2细胞因子（包括IL-4，IL-5）的产生和血清中特异性IgE的产生。与前一实验不同的是，支气管肺泡灌洗液中嗜酸性细胞数量的增加 受到抑制。4、结语 免疫应答由各种细胞和它们分泌的可溶性分子所介导，并通过各种反馈而调节。各种免疫细胞与可溶性免疫介质以及各种细胞因子之间相互刺激和制约，形成复杂的 免疫调节系统。蜂胶可以对非特异性免疫系统以及特异性免疫系统的多个环节多个途径起作用。蜂胶能有效提高巨噬细胞的作用、吞噬能力和抗氧化能力，降低其氧 化应激反应，调节其细胞因子的分泌；增加自然杀伤细胞的活性；调节多形核粒细胞的活性，控制其增殖。蜂胶对免疫系统的调节主要呈剂量依赖性，然而还需展开 进一步的研究以确定人体给制剂剂量和给制剂周期。尽管相关文献提供了一些假设和解释，但蜂胶对非特异性免疫系统的作用机制尚未得到完善的阐述，需要更多更深入 更全面的研究。同时，蜂胶的含有十分复杂，其功效是各个含有对机体协同作用的结果。所以，将蜂胶的生物学活性的研究与蜂胶功效含有的研究相结合，显得尤为 重要。