中华蜂蜜网 2019年01月30日 10时32分39秒
蜂胶HPLC指
蜂胶HPLC指纹图谱真伪鉴别初探 周 萍 章征天 胡福良 余秀珍
蜂胶的化学含有复杂，生物学活性广泛，是近年来国内外蜂产品研究与开发的热点。我国是蜂胶生产大国，近年来蜂胶产业发展迅猛，出现出口内销两旺的势头。在这样的背景下，由于利益的驱动，一些不法商贩见机制假售假，特别是以杨树胶冒充蜂胶的情况比较严重。如何提高蜂胶原料的质量，打击假冒伪劣蜂胶产品，是摆在我们面前严峻而紧迫的任务。
目前，我国的蜂胶质量标准有两个，分别是商业部的蜂胶标准(标准代号：SB/T10096-92)和农业部的无公害食品蜂胶标准(标准代号：NY/T5136-2002)。但这两个蜂胶标准均无法鉴别蜂胶与杨树胶，因为标准中规定的胶含量、总黄酮、氧化指标等项目，杨树胶均能达到。因此，建立真品蜂胶的HPLC指纹图谱，用以鉴别蜂胶真伪显得十分必要和迫切。
我们从蜂胶的功效含有——黄酮类化合物着手，测定了真品蜂胶、杨树胶和搀假蜂胶胶的HPLC指纹图谱，为蜂胶真伪的有效鉴别提供依据。
1 材料与方法
蜂胶：真品蜂胶，由杭州天地保健品有限公司实验蜂场提供。杨树胶，从市场上购入，经感官检验，初步确认。搀假蜂胶，按30%杨树胶与70%真品蜂胶混合而成。
试剂：甲醇，HPLC级；H3PO4，分析纯；乙醇，分析纯。
仪器：LC-10AT VP高效液相色谱仪(日本岛津)，UV检测器，N2000色谱工作站，METERLER电子分析天平(德国梅特勒公司)，超声波仪，双重蒸馏水器。
1.2 方法
色谱柱：Hypersil RP-C18(4.6mm×150mm，3μm)
流动相：甲醇：0.4%H3PO4=65:35
流速：1.0ml/min
检测波长：360nm
进样量：2μL
取蜂胶5g，用20mL95%乙醇超声溶解，过滤，测定蜂胶固形物，称取该液适量，使其中含蜂胶固形物20mg，用流动相定容至50ml，混匀，用0.45μm滤膜过滤，上机分析。
2 结果
2.1 蜂胶HPLC指纹图谱的建立
蜂胶HPLC图谱以360nm波长检测色谱信息最为丰富，经多批次样品重复实验，归纳出19个峰，作为主要特征峰，组成其指纹图谱。这19个特征峰的峰号和保留时间见表1。
表1 蜂胶HPLC特征峰峰号和保留时间
峰号
相对保留时间/min
峰号
相对保留时间/min
1
4.51
11
9.16
2
5.02
12
9.47
3
5.27
13
10.57
4
5.72
14
11.44
5
6.99
15
12.26
6
7.26
16
13.67
7
7.56
17
15.67
8
7.86
18
17.51
9
8.17
19
18.47
10
8.76
2.2 真品蜂胶与杨树胶HPLC指纹图谱分析(图略)
杨树胶、真品蜂胶的指纹图谱见图1、图2。粗看2个图谱，其主要色谱峰相似度在90%以上，说明两者在主要含有的组成上非常接近，这也是两者普通方法难以区别的原因。但仔细观察可以发现，真品蜂胶含有19个特征峰中的18个特征峰，缺6号峰；杨树胶含有19个特征峰中的17个特征峰，缺7号和11号峰。通过对10个真品蜂胶和杨树胶的测定，均有以上特征。特别是7吨峰，其与6号、8号之间的分离度好，是真品蜂胶区别杨树胶的关键依据。
2.3 搀假蜂胶的辨别(图略)
搀假蜂胶的HPLC指纹图谱见图3。由图3可见，搀了杨树胶的搀假蜂胶，含有6号峰；而7号峰和11号峰的峰面积显著降低，可以参照真品蜂胶和杨树胶的指纹图谱进行判别。
各种蜂胶10个特征峰的相对峰面积RA(以蜂胶总峰面积为分母，样品中各色谱峰面积为分子，计算得到)见表2。
表2 各种蜂胶7个特征峰的相对峰面积(RA/%)
产品
名称
真品
蜂胶
杨树胶
搀假
蜂胶
产品
名称
真品
蜂胶
杨树胶
搀假
蜂胶
1
6.8
4.1
5.2
7
8.0
0.0
4.3
4
8.9
10.1
9.6
11
4.9
0.0
2.1
5
1.7
3.2
2.4
13
29.8
39.5
34.4
6
0.0
3.2
2.0
搀假蜂胶中，7号峰明显低于8号和9号峰，提示含量不足；而6号峰呈现，提示搀有杨树胶。
3 讨论
黄酮类化合物为蜂胶的主要功效含有，其种类及相对含量分布对于蜂胶的鉴别具有重要意义。根据黄酮类化合物的提取、测定方法，本文建立了蜂胶的HPLC指纹图谱，反映了蜂胶中黄酮类化合物的分布特征。通过比对真品蜂胶与杨树胶的HPLC指纹图谱，特别是6号、7号、11号特征蜂，可以明显地将两者区别开来。
中制剂指纹图谱已广泛应用于中制剂质量的控制和鉴别，并有多个标准用于指导生产和加工。蜂胶HPLC指纹图谱的建立和应用能有效地制止杨树胶的泛滥。为净化蜂胶市场提供有力的检测依据。本项研究还是初步的，更深入、全面的研究有待进一步展开。
资料来源：蜜蜂杂志2005年第8期