蜂蜜中还原糖的测定

【名称】蜂蜜中还原糖的测定 
      蜂蜜中的还原糖主要是指葡萄糖、果糖和少量的麦芽糖。其测定方法主要有斐林氏(Fehling)容量法和铁氰化钾法。 
      (1)斐林氏法：操作简单、迅速，试剂稳定，是国家行业标准的推荐方法，但反应复杂、影响因素较多，因此必须在同样的操作条件下进行。 
      ①原理：当斐林氏A、B液相混合时，生成天蓝色氢氧化铜沉淀，并立即与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的氧化铜和酒石酸钾钠的络合物——酒石酸钾钠铜。在滴定时，酒石酸钾钠铜被样液中的葡萄糖和果糖还原，生成红色的氧化亚铜沉淀。滴定达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝指示剂还原为无色的隐色体，而显出氧化亚铜的鲜红色。 
      ②试剂：斐林氏A液（硫酸铜溶液）：称取结晶硫酸铜(CuS0₄•5H₂0) 34.639g，溶解于少量蒸馏水中，然后定容至500ml。 
      斐林氏B液（酒石酸钾钠溶液）：称取173g酒石酸钾钠( C₄ H₄0₆ KNa．H₂0)及50g氢氧化钠溶解于少量蒸馏水中，然后定容至500ml。 
      10%氢氧化钠溶液。 
      0.5%葡萄糖溶液：准确称取0.5g（精确至0.0002g）无水葡萄糖，加水至100ml。 
      0.1%次甲基蓝指示剂：称取0. lg次甲基蓝粉末溶解于100ml蒸馏水中，贮于有色瓶中备用。 
      斐林氏溶液效价的标定：精确吸取斐林氏A及B液各5ml于125ml的三角烧瓶中，加0.5%葡萄糖液2ml，煮沸，若蓝色不变，继续用葡萄糖液滴至浅蓝色，加0.1%次甲基蓝指示剂2滴，再继续用葡萄糖液滴定至蓝色消失为止。整个过程都应在不断沸腾的条件下操作。记录所消耗的标准葡萄糖溶液的毫升数(A) 
      10 ml斐林氏溶液相当于还原糖／g=0.5%×A 
      样液的制备：称取蜜样1g，溶入少量蒸馏水中，用10%氢氧化钠溶液调至呈弱碱性，用蒸馏水定容至100ml，摇匀后待测。 
      ③测定方法：准确吸取斐林氏A和B液各5ml，放入125ml三角瓶中，摇匀后煮沸。用滴定管加入2ml制备好的样液，再煮沸。若不褪色，则继续用滴定管趁沸腾将样液二滴滴加入，直至蓝色快消失时，加入0.1%次甲基蓝指示剂2滴，继续用样液滴定至蓝色消失为止。记录所用样液毫升数（B).。

 

 

 

      (2)铁氰化钾法：本法操作简便，容易掌握，结果准确。 
      ①原理：还原糖在碱性溶液中能把铁氰化钾还原为亚铁氰化钾，根据铁氰化钾溶液 和蜂蜜样液的滴定量，计算出蜂蜜中还原糖的含量。以葡萄糖为例，其反应式为： 
                  C₆H₁₂0₆ +6K₃Fe (CN)₆ +6KOH=(CHOH)₄•(COOH)₂ +6K₄Fe (CN)₆ +4H₂0 
      滴定终了时，稍微过量的还原糖即将指示剂次甲基蓝还原为无色。 
      ②试剂：1%铁氰化钾溶液：溶解10g铁氰化钾（分析纯）于蒸馏水中，转移至1000ml的棕色容量瓶中，用蒸馏水定容。临用前按下法标定其滴定度。 
      称取真空（≤50毫米汞柱、70℃）干燥至恒重的纯蔗糖1g（精确至0.0002g），用蒸馏水溶解后，移入250m1的容量瓶中，定容并摇匀。用移液管吸取25ml，移人100ml的容量瓶中，加入25ml蒸馏水和5ml浓盐酸（密度1.19g/ml，分析纯）。再将容量瓶置于70℃的水浴中，使瓶中溶液在2~2.5 min内热至67 – 69℃，并在69℃保持7.5~8min，使全部加热时间为10min。取出容量瓶，置流水下迅速冷却至室温。滴加l~2滴酚酞醇溶液，并加入30%的氢氧化钠溶液约7ml，然后用5%的氢氧化钠溶液中和至恰呈微碱性，用蒸馏水定容、摇匀。 
      吸取已配制好的铁氰化钾溶液10ml于250ml三角瓶中，加入10%氢氧化钠溶液2.5ml，水12.5ml和玻璃珠数粒。置石棉网上加热至沸，保持lmin。再加入1滴次甲基蓝指示剂，立即用糖液滴定至蓝色褪去为止。正式滴定时，先加入较预滴定时少0.5ml左右的糖液，煮沸1min后，加入1滴次甲基蓝指示剂，再用糖液滴定至蓝色褪去。记下此次滴定所消耗糖液的毫升数(V)，计算出铁氰化钾溶液的滴定度(T)，即每10ml l%铁氰化钾溶液相当于转化糖的克数。

 

 

 

 

      ③测定方法： 
      I．样液的制备：称取蜂蜜样品5g（精确至0.0002g）于小烧杯中，用适量蒸馏水溶解并移入1000ml的容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀后用干燥滤纸过滤到干燥的烧杯中。用移液管吸取此液25mt移入100ml容量瓶中，混匀备用。 
      Ⅱ．样液的预滴定：用移液管吸取10ml l%的铁氰化钾溶液和2.5ml 10%氢氧化钠溶液，置于100ml三角烧瓶中，用蒸馏水稀释1倍（此时可在瓶中加入几粒玻璃珠），置石棉网上煮沸。煮沸后加1滴次甲基蓝指示剂，用小火继续加热，保持沸腾，不得搅拌。将滴定管移至三角烧瓶上方，在沸腾条件下，用样液滴定至蓝色消失为止，记录样液用量。 
      Ⅲ．样液滴定：用移液管吸取10ml l%的铁氰化钾溶液和2.5ml 10%氢氧化钠溶液，置于100ml三角烧瓶中，用蒸馏水稀释1倍（此时可在瓶中加入几粒玻璃珠），从滴定管中放人较预滴定量少0.2 -0.3ml的蜂蜜样液，然后置石棉网上将瓶中溶液迅速煮沸，持续1 min。加入1滴次甲基蓝，立即用蜂蜜样液趁热滴定至蓝色消失为止。记下所耗蜂蜜样液的毫升数。